Molecular detection of anaplasmataceae agents on dogs from the departament of Piura, Peru

This study aimed to study the prevalence of Anaplasmataceae organisms through the nested-PCR and phylogenetic analysis on domestic dogs in the Department of Piura, Peru. Two hundred and twelve canine blood samples were randomly collected on dogs from the central urban areas at the Piura Department in Peru. The extracted DNAs were tested, by nested-PCR based on 16SrRNA gene, to identify agents from Anaplasmataceae family. These results show that there was a prevalence of 18.5% (40/216) of positive dogs, 13.8% (30/216) for Ehrlichia canis, 7.4% (16/216) for Anaplasma platys and 0.1% (2/216) for Ehrlichia sp. confirmed by sequencing analysis. Co-positivity among Anaplasmataceae family species was present in 25% (10/40) of positive samples. There was a significant association among Anaplasmataceae family infection in dogs and the following variables: sex (p=0.034), presence of ticks (p=0.0001), and socio-economic status (p=0.001). There was no statistical association on the variables "living with other animals" and "age group" (p=0.1074). The partial sequences on the portion of the 16S rRNA gene, from positive samples for agents of Anaplasmataceae family demonstrated an identity of 97-100% with the isolated E. canis and A. platys obtained from the GenBank. This is the first study on infection by agents of Anaplasmataceae family in dogs in the Department of Piura, through molecular analysis

Free-living capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) in an urban area in Brazil: biochemical and hematological parameters

Capybaras have found favorable conditions for survival and reproduction in green urban environments. In recent years, the population of these large rodents has been increasingly abundant in several brazilian cities such as Uberlândia, a municipality of the southeastern region with a Cerrado biome. Capybaras are important in the Brazilian Spotted Fever epidemiological chain, by amplifying infection rates of the vector population. However, knowledge of this host's physiology is scarce. Thus, the aim of this work was to describe hematological and biochemical parameters of free-living capybaras groups in urbanized areas in the city of Uberlândia, Minas Gerais State, Brazil. Capybaras were captured in 4 different locations of Uberlândia city, Minas Gerais state, including 1 Condominium (P1), 1 Private Market Garden (P2), 1 Private Club (P3) and 1 Municipal Park (P4). The animals were baited into an octagonal iron corral and chemically contained with anesthetic darts. After sedated, blood was collected from the femoral vein in tubes with and without EDTA. Biochemical evaluation, hematological analysis with differential leukocyte counts and search for Dirofilaria sp. were done. The blood count and biochemistry values obtained from animals of different ages, sex and sectors (P1, P2, P3 and P4) were submitted to the Shapiro-Wilk normality test, considering 95% significance. Values that had a normal distribution were subjected to ANOVA tests followed by Student's t-test. Values that did not follow normality were submitted to the Kruskal-Wallis test, to obtain a P-value, with a significance level of 95%. A total of 19 capybaras were captured: 4 in P1, 6 in P2, 4 in P3 and 5 in P4. From the 19 animals, 13 were females (68.42%) and 6 were males (31.57%), 12 adults (63.15%) and 7 juveniles (36.84%). Apart from occasional skin scars and moderate to intense Ambyomma spp. tick infestations, all captured animals were healthy on a broad examination. From 5 animals captured in P4, despite the use of anticoagulant, blood from 4 animals clotted fast. No microfilariae were found in the thick drop test in any of the 19 animals sampled, and in 2 adult female capybaras captured in P1, Kurloff cells were observed. Hematological and biochemical values presented no major differences when comparing sex and age. Nevertheless, differences in liver and kidney profile were observed between the capybara groups, including ALT, alkaline phosphorus, BUN and creatinine. Blood from 4 animals clotted fast, despite the use of EDTA tubes. Blood clotting of samples with anticoagulant in this work could be associated with some physiological features inherent to capybaras. Many attempts were required to obtain enough blood from each individual due to the rapid hemostasis, what come in accordance with reports in literature. Kurloff cells were observed in 2 adult female capybaras captured in P1, which can be found in peripheral blood of female rodents during follicular phase of estrous cycle. Hematological and biochemical values differences in liver enzymes such as ALT and alkaline phosphorus, and kidney profile enzymes including BUN and creatinine could be associated to capture stress or dietetic variation between groups. Despite statistical relevant, the values were still in accordance with other works, although comparisons should be done with caution since various environments exert a diverse array of stimulus upon the animals such as parasitic, infective, stress, nutritional, social and undoubtedly blood parameters mirror them. In conclusion, this work contributes to the standardization of free-living capybaras' physiological parameters in urban areas.(AU)

Perfil clínico e laboratorial de cadelas sororeativas para erliquiose tratadas em um Hospital Veterinário Universitário em Niterói, Estado do Rio de Janeiro, Brasil / Clinical and laboratory profile of dogs seroreactive to ehrlichiosis treated at the Veterinary Medical Teaching Hospital in Niterói, State of Rio de Janeiro, Brazil

Ehrlichiosis is a tick-borne disease highly prevalent in Brazil, and is relevant in canine clinical practice due to its high morbidity and mortality. Its clinical signs are nonspecific and its phases are acute, lasting 2 to 4 weeks; subclinical, i.e., asymptomatic; and chronic, resembling an autoimmune disease. The purpose of this study was to identify the occurrence of reactivity to Ehrlichia canis of bitches treated at the Veterinary Medical Teaching Hospital of the Universidade Federal Fluminense (UFF) - Niterói, RJ, Brazil, based on serological examination by iELISA, and to compare the hematological, biochemical, urinary protein-creatinine and urinary density profiles of reactive and non-reactive animals. This study involved solely bitches, regardless of breed, starting at 1 year of age. One hundred and thirty bitches, 1 to 16 year-old (mean age 7.02 ± 4.00), weighing 1.5 to 50 kg (mean weight 12.12 ± 10.65) were subjected to clinical examination and abdominal ultrasound. Complete blood count, biochemical measurements, urinalysis and serology for E. canis were also performed. The serum was used in the iELISA to identify immunoglobulin G (IgG), using a canine Ehrlichia Imunotest® diagnostic kit (Imunodot®, Jaboticabal, SP, Brazil) according to the manufacturer's instructions. Sixty animals (46.20%) were reactive to E. canis. According to their owners, only 5 (8.3%) of the 60 seroreactive animals had a history of tick-borne disease. The most common profile was that of mixed breed animals living with their owners, older than 7 years, who had not been treated preventatively with specific drugs against ectoparasites. Laboratory tests showed significant differences between groups in terms of total protein (TP), and calcium and urinary protein-creatinine ratio (UPC). TP and UPC were elevated in the non-reactive group, while the only significant change in the reactive group was mild hypocalcemia. In this study, 30% (18/60) of the bitches were seroreactive to E. canis and had hypocalcemia. Of these, 50% (9/18) had a UPC above 0.5. Furthermore, 66.7% (12/18) of this group with hypocalcemia also showed urine density (UD) of less than 1024. Among these 18 bitches, 5 had both alterations, i.e., UPC > 0.5 and UD < 1024. In this study, a high prevalence of bitches seroreactive to Ehrlichia canis was observed, despite the absence of clinical and/or laboratory signs indicative of the disease. In the investigation of IgG class antibodies, it is not possible to determine the exact time of infection, and titers may remain high for a period of more than 11 months, even after treatment and elimination of the bacterium. The fact that most seroreactive bitches showed no symptoms compatible with the disease either before or during the study suggests that they were in the subclinical phase of ehrlichiosis. The main reason for calcium metabolism disorders is a phosphorus imbalance, a condition that occurs in kidney diseases. Isosthenuria reflects the kidney's inability to concentrate urine. This finding may be one of the first clinical manifestations of chronic kidney disease (CKD), especially in dogs. On the other hand, the UPC ratio may increase with the progression of CKD. The presence of hypocalcemia, isosthenuria and increased UPC associated with seroreactivity suggests that infection by E. canis may be associated with the onset of CKD. Veterinarians should keep in mind the complexity of the pathophysiology of ehrlichiosis to ensure the disease is not underdiagnosed in any of its phases, thereby ensuring the correct treatment is provided. Such awareness is expected to reduce the chronicity of the disease and underlying sequelae among dogs.(AU)

Mycoplasma spp. in captive snakes (Boa constrictor and Bothrops atrox) from Brazil / Mycoplasma spp. em cobras de cativeiro (Boa constrictor e Bothrops atrox) do Brasil

ABSTRACT: Although rare, mycoplasmas are included among the causes of respiratory diseases in reptiles and, in the order Squamata, three reports of these microorganisms causing diseases in pythons have already been reported. This study aimed to evaluate the occurrence of Mycoplasma species in captive snakes. A total of 26 snakes of the families Pythonidae (13), Boidae (7), Viperidae (5) and Colubridae (1) from RioZoo, Brazil, were evaluated. Animals were examined to determine clinical signs consistent with any infectious disease. Tracheal swab samples from snakes were collected in Frey medium and analyzed for the presence of Mycoplasma spp.by isolation and a genus-specific PCR. DNA sequencing analyses of six positive samples by PCR were carried out to identify the species. Using isolation 19.23% (5/26) was positive, while 65.38% (17/26) of the animals were positive by PCR. Based on the analyses of the six sequences obtained, there was similarity with a Mycoplasma spp. previously described in a phyton and, M. agassizii and M. testudineum reported in chelonians. This is the first report of Mycoplasma spp. in animals of the families Boidae and Viperidae. Mycoplasma spp. were detected in snakes with and without clinical signs. The mycoplasmas reported resented identity (range, 95% to 100%) to others already described in reptiles. There was no relationship between the presence of Mycoplasma spp. and clinical signs.

RESUMO: Embora raros, os micoplasmas estão incluídos entre as causas de doenças respiratórias em répteis e, na ordem Squamata, já foram realizados três relatos destes microrganismos causando doença em pítons. Este estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de espécies de Mycoplasma em serpentes em cativeiro. Foram avaliadas 26 serpentes das famílias Pythonidae (13), Boidae (7), Viperidae (5) e Colubridae (1) do RioZoo, Brasil. Os animais foram examinados para determinar sinais clínicos consistentes com qualquer doença infecciosa. Amostras de swab traqueal de cobras foram coletadas em meio Frey e analisadas por isolamento microbiológico e pela técnica da PCR para identificar Mycoplasma spp. As amostras positivas para o gênero Mycoplasma spp. foram submetidas ao sequenciamento genético para identificação das espécies. No isolamento, 19,23% (5/26) foram positivos, enquanto 65,38% (17/26) dos animais foram positivos por PCR. Com base nas análises das seis sequências obtidas, houve similaridade com o Mycoplasma spp. descrito anteriormente em um píton e M. agassizii e M. testudineum encontrados em quelônios. Este é o primeiro relato de Mycoplasma spp. em animais das famílias Boidae e Viperidae. Mycoplasma spp. foi detectado em serpentes com e sem sinais clínicos. Os micoplasmas encontrados apresentaram semelhança genética com outros já descritos em répteis. Não houve relação entre a presença de Mycoplasma spp. e sinais clínicos.

Spotted fever group rickettsial infection in dogs and their ticks from domestic-wildlife interface areas in southeastern Brazil / Infecção por rickettsias do Grupo da Febre Maculosa em cães e carrapatos de áreas de interface doméstico-silvestre no sudeste Brasileiro

Abstract Rickettsia rickettsii is the causative agent of Brazilian spotted fever (BSF), for which humans and dogs are both susceptible. Dogs are sentinels in serological surveys, however, canine disease is rarely reported. Therefore, we aimed to evaluate natural infection by spotted fever group (SFG) Rickettsia spp. in dogs and ticks collected from domiciles close to forest fragments, featuring domestic-wildlife interface areas. Samples from 115 dogs and 135 ixodids were assessed by polymerase chain reactions (PCR) targeting the gltA gene for Rickettsia spp. and the ompA gene for the SFG rickettsial species. One dog (0.87%; 1/115) was positive for R. rickettsii. This dog presented nonspecific laboratory and clinical abnormalities (thrombocytopenia, hyperproteinemia, lymph node enlargement, emaciation, anorexia, and lethargy). Rickettsia parkeri was identified in 2.96% (4/135) of the ticks (Amblyomma sculptum, A. aureolatum, and Rhipicephalus sanguineus). This study confirmed the presence of SFG bacteria in non-endemic and preserved locations, where domestic and wild populations interact. We reinforce the fact that the dog is susceptible to natural R. rickettsii infection. Although this is a rare finding, preventive measures should be taken against BSF in the studied areas. Finally, R. parkeri infection is possibly being demonstrated in A. sculptum for the first time.

Resumo Rickettsia rickettsii é o agente causador da Febre Maculosa Brasileira (FMB), doença na qual humanos e cães são susceptíveis. Os cães são sentinelas nos inquéritos sorológicos, contudo, a doença canina é raramente descrita. Assim sendo, objetivou-se avaliar a infecção natural por Rickettsia spp. do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães e carrapatos obtidos de domicílios próximos a fragmentos de mata, caracterizando áreas de interface doméstico-silvestre. Amostras de 115 cães e 135 ixodídeos foram avaliadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) tendo como alvo o gene gltA de Rickettsia spp. e o gene ompA das espécies do GFM. Um cão (0,87%; 1/115) foi positivo para R. rickettsii. Este animal apresentou alterações clínicas e laboratoriais inespecíficas (trombocitopenia, hiperproteinemia, linfonodos edemaciados, emagrecimento, anorexia e letargia). Rickettsia parkeri foi identificada em 2,96% (4/135) dos carrapatos (Amblyomma sculptum, A. aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Este estudo confirmou a presença de bactérias do GFM em locais preservados e não endêmicos, onde populações domésticas e silvestres interagem. Reforçamos o fato do cão ser susceptível à infecção natural por R. rickettsii. Embora este seja um achado raro, medidas preventivas devem ser tomadas contra a FMB nas áreas estudadas. Em última análise, a infecção por R. parkeri possivelmente está sendo demonstrada pela primeira vez em A. sculptum.

Circulation of spotted fever group rickettsiae among dogs seropositive for Leishmania spp. in an urban area of Brazil

Abstract INTRODUCTION: Dogs play an epidemiological role in several vector-borne diseases that affect human and animal health worldwide. We aimed to identify rickettsial circulation among dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) from a region endemic for both diseases. METHODS: CVL-seropositive dogs were screened for spotted fever group rickettsiae using an indirect immunofluorescence assay. RESULTS: Among the CVL-positive dogs, anti-Rickettsia rickettsii antibodies were identified in one asymptomatic and one oligosymptomatic dog. CONCLUSIONS: This study shows low circulation of antibodies to R. rickettsii in CVL-seropositive dogs. It is recommended that surveillance studies in dogs should continue in order to monitor this scenario.

Feline herpesvirus 1 viral load related to environmental factors in sheltered cats / Relação entre carga viral de herpesvirus felino 1 e fatores causadores de estresse em felinos de abrigo

ABSTRACT: Shelter environment stress factors are related to FHV-1 viral reactivation. However, comparisons between conjunctival viral load and environmental factors have not been commonly evaluated. The aim of this study was to correlate FHV-1 viral load in domestic cats with and without clinical signs of conjunctivitis to shelter design in order to use FHV-1 viral load as a parameter of "health management". Cats from four different shelters underwent an ophthalmological examination. Samples were collected by rolling a DNA/RNAse-free cytobrush over the ventral conjunctival fornix and were stored in 1.5 mL sterile microtubes in 500 μL of Eagle's minimum essential medium and kept at 4 ºC. Molecular procedures were performed up to 48 hours after collection. Different routines regarding new arrivals were directly related to FHV-1 viral load. Shelters where new arrivals occurred on daily basis had the highest viral load (2.69x108 copies/µL), while those shelters where new arrivals had not occurred in the few months prior to the beginning of the study had the lowest rate (1.63x103 copies/µL). Environmental factors directly influenced FHV-1 DNA viral load. This study highlighted the need to improve the management approach in the animal shelter environment to reduce stressful situations responsible for FHV-1 reactivation and higher viral load quantification.

RESUMO: No ambiente do abrigo encontram-se fatores que geram estresse nos animais que ali residem. Esses fatores acabam por provocar a reativação do FHV-1. No entanto, comparações entre carga viral conjuntival e fatores ambientais não foram ainda avaliadas. Objetivo deste estudo foi correlacionar a carga viral de FHV-1 em felinos domésticos com e sem sinais clínicos de conjuntivite com as características dos abrigos. Assim, pode-se usar carga viral de FHV-1 como parâmetro de sanidade. Todos os gatos foram submetidos a exame clínico oftalmológico. Amostras foram coletadas com uso de escova citológica, acondicionadas em microtubos estéreis de 1,5mL contendo 500 μL de meio Eagle essencial mínimo e mantidas em 4 ºC. Análises moleculares foram realizadas no prazo de 48 horas após coleta. A rotina de entrada de novos animais estava diretamente relacionada a carga viral de FHV-1. Abrigos com entrada diária apresentaram carga viral maior (2.69x108 cópias/µL), do que abrigo onde novos animais não chegaram nos meses que antecederam a coleta (1.63x103 cópias/µL). Fatores ambientais influenciam diretamente carga viral de FHV-1. Esse estudo evidencia a necessidade de aprimorar o sistema de manejo dos abrigos de forma a reduzir situações de estresse responsáveis pela reativação de FHV-1 e consequente aumento na carga viral.

Clinical and hematological evaluation of Rangelia vitalii-naturally infected dogs in southeastern Brazil / Avaliação clínica e hematológica de cães naturalmente infectados por Rangelia vitalii no sudeste do Brasil

Abstract Rangelia vitalii, a tick-borne piroplasm that infects dogs, has been recently molecularly characterized in Brazil, Uruguay and Argentina. Studies on molecular characterization of these piroplasms in different Brazilian regions are scarce. The aim of this study was to evaluate clinical and hematological changes in dogs caused by R. vitalii in the mountainous region of the state of Rio de Janeiro. Blood samples from 36 dogs were evaluated for piroplasms and hematological disorders using light microscopy and molecular analysis. Blood samples from all the animals included in this study were confirmed to be positive for R. vitalii through genetic sequencing. Clinical signspresented by 24 of the 36 dogs of the study were evaluated during appointments or hospitalization within private practice. The most frequent clinical disorders in these dogs that were naturally infected with R. vitalii were fever, spontaneous cutaneous bleeding and diarrhea. Normochromic non-regenerative anemia and thrombocytopenia were the most common hematological disorders in these R. vitalii-positive dogs and therefore should be considered in hematological evaluations on suspected cases.

Resumo Rangelia vitalii, um piroplasma transmitido por carrapatos que infecta cães, foi sendo recentemente caracterizado molecularmente no Brasil, Uruguai e Argentina. Nas diferentes regiões brasileiras são escassos os estudos acerca da caracterização molecular destes piroplasmídeos. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações clínicas e hematológicas em cães causadas por R. vitalii na região serrana do Rio de Janeiro. Amostras de sangue total de 36 cães foram examinadas quanto à presença de piroplasmas pela microscopia de luz, alterações hematológicas e análise molecular. Todos os cães do presente estudo foram positivos para R. vitalii através do sequenciamento genético. Dos 36 animais positivos para R. vitalii, 24 foram avaliados clinicamente. As alterações mais frequentemente observadas foram febre, sangramento cutâneo espontâneo e diarréia. Anemia normocítica normocrômica arregenerativa e trombocitopenia foram as alterações hematológicas mais observadas em cães positivos para R. vitalii, devendo ser consideradas na avaliação hematológica de cães suspeitos.

Pesquisa de hemoglobinopatias em cães da região metropolitana do Rio de Janeiro portadores de anemia crônica / Search for hemoglobinopathies in dogs with chronic anemia in the metropolitan region of Rio de Janeiro

Talassemias e hemoglobinopatias são condições hereditárias encontradas em humanos de todo o mundo. Em medicina veterinária, o polimorfismo de hemoglobinas tem sido estudado em animais de produção, mas não existem relatos de hemoglobinopatias em cães, e os estudos envolvendo o polimorfismo de hemoglobinas nesta espécie são escassos. Com o objetivo de pesquisar variantes da hemoglobina em cães, foram coletadas amostras de sangue de 202 caninos de variadas raças, sendo 130 portadores de anemia crônica (Grupo Experimental) e 72 animais clinicamente saudáveis (Grupo Controle). Estas amostras foram submetidas à eletroforese alcalina de hemoglobinas, que permitiu a separação e quantificação das frações de hemoglobina por densitometria, e posteriormente submetidas à eletroforese de hemoglobinas em meio ácido, técnica utilizada em medicina humana para a separação de frações de hemoglobinas variantes que não se diferenciam em meio alcalino. O eritrograma e índices hematimétricos foram obtidos concomitantemente. Os métodos utilizados demonstraram que a HbA é o maior componente da hemoglobina canina, e que uma pequena quantidade de HbA2 pode ser detectada em uma parcela dos animais avaliados, sendo que a maioria dos caninos apresentava exclusivamente HbA em sua composição. Concluiu-se que a presença ou ausência de HbA2 não interfere nos índices hematimétricos dos animais avaliados, e que quando comparadas as hemoglobinas dos grupos Experimental e Controle, não são observadas diferenças na distribuição das frações destas, além de não serem observadas hemoglobinas variantes nos caninos avaliados.(AU)

Thalassemias and hemoglobinopathies are hereditary conditions found in humans throughout the world. In veterinary medicine, hemoglobin polymorphism has been studied in production animals, but there are no reports of hemoglobinopathies in dogs, and studies involving hemoglobin polymorphism in this species are scarce. In order to search for hemoglobin variants in dogs, blood samples were collected from 202 dogs of various breeds, being 130 patients with chronic anemia (Experimental Group) and 72 clinically healthy animals (Control Group). These samples were subjected to alkaline electrophoresis of hemoglobin, which permitted separation and quantification of hemoglobin fractions by densitometry, and then subjected to hemoglobin electrophoresis in an acid medium, a technique used in human medicine for the separation of variant fractions of hemoglobin that do not differentiate in an alkaline medium. The erythrogram and RBC indices were obtained concurrently. The methods demonstrated that HbA is the major component of canine hemoglobin, and a small amount of HbA2 can be detected in some of the evaluated animals, and most dogs showed only HbA in its composition. It was concluded that the presence or absence of HbA2 does not interfere with RBC indices of evaluated animals, and the comparison between the hemoglobin of Experimental and Control groups showed no differences in fractions distribution between them, and there was no hemoglobin variants in evaluated canines.(AU)

Behavior of red cell distribution width (RDW) in a population of anemic and non-anemic dogs from an ambulatory care unit

O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento do índice de anisocitose na interpretação do hemograma de cães anêmicos e não anêmicos. Atualmente, contadores hematológicos automatizados veterinários fornecem alguns índices que não são calculados quando o hemograma é confeccionado manualmente. A saber: RDW-CV (Amplitude de distribuição de hemácias como coeficiente de variação) e RDW-SD (Amplitude de distribuição de hemácias como desvio-padrão). Tais índices levaram a uma nova abordagem do paciente com anemia permitindo que a anisocitose fosse mensurada de uma forma quantitativa. Foram avaliados 454 hemogramas processados no período de setembro de 2009 a março de 2011. Foram calculados média e desvio padrão e uma análise de variância foi realizada. Os cães anêmicos (125/454) apresentaram altos valores de RDW enquanto que, em animais não anêmicos, esse índice permaneceu dentro dos valores de normalidade previamente estabelecidos. O índice também estava alto em animais com anisocitose observada à microscopia. Houve uma diferença significante entre os índices dos animais que apresentaram Volume Globular Médio (VGM) elevado e normal. Concluiu-se que os índices RDW-CV e RDW-SD foram sensíveis a pequenas variações no tamanho das hemácias e na heterogeneidade, sendo mais precisos que a observação microscópica para se detectar anisocitose e mais sensível que VGM para variação eritrocitária.

The aim of this study was to evaluate the behavior of the red cell distribution width (RDW) in the interpretation of the Complete Blood Count (CBC) from anemic and non-anemic dogs. Currently, automated veterinary blood cell analyzers provide hematologic indices not calculated in manually performed CBC, such as Red Blood Cell Distribution Width measured by Variation Coefficients (RDW-CV) and Red Blood Cell Distribution Width measured by Standard Deviation (RDW-SD), which has led to new of September 2009 to March 2011. Mean and standard deviation were calculated and variance analysis was performed. Anemic dogs (125/454) presented higher values for RDW indices. In non-anemic animals, these indices were in accordance with the normal values previously established. Both indices were higher in dogs with microscopic observation of anisocytosis. There was a significant difference among índices of the animals which showed normal and increased Mean Corpuscular Volume (MCV). We concluded that RDW-CV and RDW-SD indices were sensitive to small variations on erythrocyte size and heterogeneity, being more accurate than microscopic observations to detect anisocytosis and more sensitive than MCV to erythrocyte variation.

Genetic diversity of Ehrlichia canis strains from naturally infected dogs in Rio de Janeiro, Brazil / Diversidade genética de cepas de Ehrlichia canis encontradas em cães naturalmente infectados no Rio de Janeiro, Brasil

The aim of this study was to characterize Ehrlichia canis strains from naturally infected dogs in Rio de Janeiro, Brazil. In addition, all the clinical and hematological findings observed in these dogs were reported. PCR targeting the 16S rRNA gene was used for diagnostic purposes, and the TRP19 and TRP36 genes were sequenced to evaluate the genetic diversity. Fifteen samples were positive for E. canis. The polymerase chain reaction for the TRP19 gene resulted in 11 amplicons (11/15), which were cloned into the pGEM-T easy vector for sequencing. The complete sequence of TRP19 gene was compared to those in the GenBank, revealing high identicalness. Phylogenetic analysis on the TRP36 gene sequences demonstrated two distinct strains from two dogs, named 56C and 70C. The 56C strain was grouped with the strain Cuiaba 16, which is a hybrid strain formed by Brazilian and US genogroups; and the 70C strain was grouped with other strains of the US genogroup, thus suggesting that there are at least two genogroups of E. canis in Rio de Janeiro (US and Brazilian). Those animals, in which the 70C and 56C strains were isolated, showed distinct clinical and hematological manifestations of 1the disease. The appearance of different genotypes may express new phenotypes, thus resulting in different forms of presentation of the disease and making its diagnosis more complex.

O objetivo deste estudo foi caracterizar as cepas de Ehrlichia canis em cães naturalmente infectados no Rio de Janeiro, Brasil. Além disso, os achados clínicos e hematológicos observados nos cães foram relatados. O gene 16S rRNA foi utilizado como alvo da PCR para fins diagnósticos, e os genes TRP19 e TRP36 para avaliar a diversidade genética. Quinze amostras foram positivas para E. canis. PCR para o gene TRP19 produziu 11 amplicons (11/15) que foram clonados no pGEM-T easy vector para sequenciamento. A comparação das sequências completas do gene TRP19 com outras sequências depositadas no GenBank revelou uma alta identidade. Duas amostras (56C e 70C) após o ensaio da PCR, tendo como alvo o gene TRP36, geraram sequências, e a análise filogenética mostrou que a cepa 56C foi agrupada com a cepa Cuiabá 16, que é uma cepa híbrida, formada pelo genogrupo Brasileiro e o genogrupo US; e a cepa 70C agrupou com as outras cepas do genogrupo US, sugerindo a existência de pelo menos dois genogrupos de E. canis no Rio de Janeiro (US e Brasileiro). Esses animais apresentaram manifestações clínicas e hematológicas distintas, e diferentes genótipos podem expressar novos fenótipos, resultando em diferentes formas de apresentação da doença e fazendo com que o diagnóstico seja mais complexo.

Cytauxzoon felis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' coinfection in a brazilian domestic cat (Felis catus) / Co-infecção por Cytauxzoon felis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' em um gato doméstico (Felis catus) no Brasil

This article describes the first detection of Cytauxzoon felis, using molecular techniques, in a naturally infected domestic cat from Brazil, South America. Coinfection with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' was also found. The molecular identification of the piroplasmid species was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing analysis. A 284 pb fragment of the gene encoding the 18S ribosomal RNA region was amplified and showed 99% identity with other C. felis strains from North America. In addition, PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis, which amplifies a 595 bp fragment of the gene encoding 16S ribosomal RNA of some bacterial species, identified the co-infecting species as 'Candidatus M. haemominutum'.

Este artigo descreve a primeira detecção de Cytauxzoon felis em um gato doméstico naturalmente infectado no Brasil, América do Sul, através de técnicas moleculares. Também foi encontrada co-infecção com 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. A detecção molecular da espécie do piroplasmídeo foi realizada através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento. Um fragmento de 284 pb do gene codificador da região 18S do RNA ribossomal do parasito foi sequenciada e mostrou 99% de identidade com outros isolados de C. felis da América do Norte. Ademais, através da análise por meio de PCR-RFLP (Polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição), que amplifica um fragmento de 595 pb do gene codificador da porção 16 do RNA ribossomal de algumas espécies de bactérias, concluiu-se que a espécie com-infectante era 'Candidatus M. haemominutum'.

Detection and molecular characterization of piroplasms species from naturally infected dogs in southeast Brazil / Detecção e caracterização molecular de piroplasmas em cães naturalmente infectados no Sudeste do Brasil

Rangelia vitalii is a protozoon described from dogs in the south and southeast regions of Brazil. It is phylogenetically related to Babesia spp. that infects dogs, but data on this enigmatic parasite is still limited. The aim of this work was to detect piroplasm species in dogs in the state of Rio de Janeiro, Brazil, by 18S rRNA gene-based PCR assay, restriction fragment length polymorphism (RFLP) and sequence analyses. Of 103 dogs examined, seven (6.8%) were positive for Babesia spp. by PCR. The amplified products were digested by restriction enzymes to differentiate the Babesia species, and one sample was identified as Babesia vogeli. The pattern observed for the other six amplification products did not match with pattern described for large Babesia infecting dogs. Sequencing analysis confirmed these six samples as R. vitalii, with high homologies (99-100%) with a sequence from south Brazil. This study confirms the presence of Babesia vogeli and Rangelia vitalii circulate in domestic dogs in Teresópolis, Rio de Janeiro, Brazil.

Rangelia vitalii é um protozoário que infecta cães e foi descrito nas regiões Sul e Sudeste do Brasil. R. vitalii é filogeneticamente próxima à Babesia spp., mas dados deste misterioso parasito ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de piroplasmas em cães naturalmente infectados no estado do Rio de Janeiro, através da amplificação do gene 18S rRNA pela PCR, clivagem com enzimas de restrição (RFLP) e caracterização genética através do sequenciamento. De 103 cães, sete (6,8%) foram positivos para Babesia spp. pela PCR. Os produtos amplificados foram digeridos por enzimas de restrição para a diferenciação das espécies de Babesia e uma amostra foi identificada como Babesia vogeli. O padrão de amplificação observado nas outras seis amostras não correspondeu ao padrão descrito para babesias que infectam cães. O sequenciamento das seis amostras confirmou ser uma espécie geneticamente idêntica a R. vitalii apresentando grande homologia (99-100%) com a sequência do sul do Brasil. Este estudo confirma a presença de Babesia vogeli e Rangelia vitalii infectando cães em Teresópolis, Rio de Janeiro, Brasil.

Risk factors and clinical disorders of canine ehrlichiosis in the South of Bahia, Brazil / Fatores de risco e alterações clínicas da erhlichiose canina no sul da Bahia, Brasil

The aim of this work was to study the clinical disorders and risk factors of canine ehrlichiosis in Ilhéus and Itabuna, Bahia, and compare different diagnostic methods. Blood samples were collected from 200 dogs. Each dog was clinically examined. A questionnaire was used to evaluate the risk factors. The blood samples were analyzed using the Dot-ELISA test; hematometry, platelet counts and searches for morulae on blood smears were performed. Nested PCR was carried out on 50 serologically positive samples and 50 negative samples. Three positive PCRs were sequenced. Thirty-six percent were serologically positivity and 5.5 percent from blood smears. The animals were anemic and thrombocytopenic. Presence of ticks and living in areas on the urban periphery were considered to be risk factors (p < 0.05). Nested PCR identified 11 positive dogs of which nine were serologically positive and two were negative. The DNA sequencing was consistent with the presence of Ehrlichia canis.

Objetivou-se com este trabalho estudar as alterações clínicas, fatores de risco da ehrlichiose canina nos municípios de Ilhéus e Itabuna, Bahia, e comparar diferentes métodos de diagnóstico. Amostras de sangue foram coletadas de 200 cães e cada animal foi examinado clinicamente. Foi preenchido um questionário para avaliar os fatores de risco. As amostras de sangue foram analisadas pelo teste Dot-ELISA e foram realizadas hematimetria, contagem de plaquetas e procura de mórulas em esfregaço de sangue. Nested-PCR foi realizada em 50 amostras positivas e 50 negativas na sorologia. Três amostras PCRs positivas foram seqüenciadas. Foi encontrado 36,0 por cento de positividade na sorologia e 5,5 por cento nos esfregaços sanguíneos. Os animais apresentavam anemia e trombocitopenia. Ter carrapatos e residir em áreas suburbanas foram considerados fatores de risco (p < 0,05). A Nested-PCR identificou 11 cães positivos, sendo 9 com sorologia positiva e 2 negativos. O sequenciamento de DNA foi compatível com a presença de Ehrlichia canis.

Serum biochemistry profile determination for wild loggerhead sea turtles nesting in Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brazil / Determinação do perfil bioquímico sérico de tartarugas marinhas de vida livre da espécie em nidação em Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil

Sea turtles are threatened to the point of extinction. The major goal of rehabilitating sick individuals is to eventually reintroduce them back into their habitat. In this way, they contribute to species preservation, as well as maintaining equilibrium of the ecosystems. Biochemical analysis is a commonly used test to detect illness and evaluate the general health of the animals. However, the data in the literature on sea turtles are scarce and the majority of studies used small sample sizes, being the majority of animals in captivity. The aim of the present study is to establish baseline biochemical profile values for free-ranging, nesting, female loggerhead turtles (Caretta caretta). The baseline values can then be used for comparison in the overall evaluation, physiologic status and disease diagnostics of diverse populations of sea turtles. Twenty-eight females in their reproductive period were used from Farol de São Thomé (21°45'15"S - 41°19'28"W), city of Campos dos Goytacazes, north-fluminense region. The samples were collected without anticoagulant through venapuncture of the dorsal, cervical sinus. The average values determined were calcium, phosphorus, cholesterol and triglycerides, demonstrating a correlation with vitellogenesis and egg formation. The fact that females reduce feeding in the period preceding egg laying, influenced the average concentration of urea (35.25mg dL-1), sodium (147mEq L-1), potassium (28mEq L-1), uric acid (0.6mg dL-1) and lipids. Carapace length and width, and the weight of the turtles showed a positive correlation with liver enzymes ALT and AST, suggesting that animals with larger hepatic volume have greater enzymatic activity.

As tartarugas marinhas são animais ameaçados de extinção. Sendo assim, o maior objetivo em reabilitar os indivíduos doentes é posteriormente reintroduzi-los em seu habitat. Dessa forma, contribui-se para a preservação das espécies e para a manutenção do equilíbrio dos ecossistemas. As análises bioquímicas são exames bastante utilizados na detecção de doenças e na avaliação do estado geral dos animais. Apesar disso, os dados na literatura para tartarugas marinhas ainda são escassos, e a maioria dos estudos utiliza um pequeno número de animais, sendo a maior parte deles de cativeiro. O presente estudo tem por objetivo realizar o perfil bioquímico de indivíduos do sexo feminino de tartarugas marinhas de vida livre da espécie Caretta caretta em processo de nidação, bem como estabelecer a correlação do perfil bioquímico destes animais com seu tamanho. Os valores médios obtidos poderão ser utilizados posteriormente como comparativo para avaliação do estado geral e para o diagnóstico de doenças de diversas populações de tartarugas marinhas. Foram utilizadas 28 fêmeas em período reprodutivo, em Farol de São Thomé (21°45'15"S - 41°19'28"W), no município de Campos dos Goytacazes, região norte-fluminense. As amostras foram coletadas sem anticoagulante, através de venopunção do seio venoso cervical dorsal. Os valores médios encontrados para as variáveis cálcio, fósforo, colesterol e triglicerídeos demonstram a correlação desses componentes com o processo de vitelogênese e a formação do ovo. O fato de as fêmeas reduzirem a alimentação, no período que antecede a postura dos ovos, influenciou a concentração média de uréia (35,25mg dL-1), sódio (147mEq L-1), potássio, ácido úrico e lipídios. As variáveis vinculadas ao tamanho das tartarugas apresentaram correlação positiva com enzimas ALT e AST, sugerindo que animais com maior volume hepático apresentam maior atividade enzimática.

Bioquímica plasmática de cascavéis (Caudisona durissa LINNAEUS, 1758) em cativeiro / Blood biochemical parameters from captivity rattlesnake (Caudisona durissa LINNAEUS, 1758)

Acidentes com seres humanos envolvendo a espécie Caudisona durissa possuem a mais alta taxa de letalidade dentre os viperídeos brasileiros. Ressalta-se então a importância para a saúde pública da criação dessa espécie em cativeiro para produção de soro antiofídico. No entanto, essa atividade ainda hoje encontra alguns desafios como a instalação de doenças no plantel, evidenciando a importância de estudos sobre a fisiologia de serpentes. Dessa forma, foram realizadas análises de bioquímica plasmática em 53 serpentes da espécie Caudisona durissa, mantidas em cativeiro. Foram utilizadas amostras de plasma com heparina e as dosagens bioquímicas realizadas em aparelho automatizado (Ciba Corning - Express Plus®). Os resultados e seus respectivos desvios-padrões foram: uréia -1,32mg dL-1 (±1,1); ácido úrico - 2,08mg dL-1 (±1,4); creatinina - 0,52mg dL-1 (±0,2); proteína total - 3,7g dL-1 (±0,7); albumina - 1,62g dL-1 (±0,4); globulinas - 2,08g dL-1 (±0,5); cálcio - 15,25mg dL-1 (±2,8); fósforo - 4,61mg dL-1 (±1,9); colesterol - 171,58mg dL-1 (±52,7); triglicerídeos - 19,29mg dL-1 (±14,3); fosfatase alcalina - 31,04U L-1 (±12,4); aspartato aminotransferase (AST) - 22,25U L-1 (±11,4); alanina aminotransferase (ALT) - 7,11U L-1 (±5,4) e Amilase - 1385,23U L-1 (±568,7). Foram calculados os seguintes índices: relação uréia/creatinina - 2,5 e relação cálcio/fósforo - 3,3. O conjunto de resultados das análises bioquímicas do sangue das cascavéis em cativeiro pode servir como referência para apoio diagnóstico na espécie estudada e para outros trabalhos com o mesmo caráter de observação.

Human accidents involving rattlesnake Caudisona durissa have the highest fatality rate among the Brazilian Viperidae family. Breeding this specie in captivity in order to produce antivenoms is very important to public health. Nevertheless, there are some challenges that this activity must face, like the onset of diseases on the breeding stock, justifying the importance of studying these snakes' physiology. Blood biochemical analysis of 53 Caudisona durissa was performed using plasma samples in an automated equipment (Ciba Corning - Express Plus®). Mean values and its respective Standard deviations are: blood urea nitrogen (BUN) -1.32mg dL-1 (±1.1); uric acid - 2.08mg dL-1 (±1.4); creatinine - 0.52mg dL-1 (±0.2); total protein - 3.7g dL-1 (±0.7); albumin - 1.62g dL-1 (±0.4); globulins - 2.08g dL-1 (±0.5); calcium - 15.25mg dL-1 (±2.8); phosphorus - 4.61mg dL-1 (±1.9); cholesterol - 171.58mg dL-1 (±52.7); triglycerides - 19.29mg dL-1 (±14.3); alkaline phosfatase - 31.04U L-1 (±12.4); aspartate aminotransferase (AST) - 22.25U L-1 (±11.4); alanin aminotransferase (ALT) 7.11U L-1 (±5.4); amylases - 1385.23U L-1 (±568.7). The following indexes were calculated: BUN/creatinine ratio - 2.5 and calcium/phosphorus ratio -3.3. Rattlesnake blood biochemical results above could be used as reference in clinical evaluation for captivity C. durissa.

Bartonelose: análise molecular e sorológica em gatos do Rio de Janeiro Brasil / Bartonellosis: molecular and serological analysis in cats from Rio de Janeiro – Brazil

Bartonella henselae e mais recentemente B. quintana têm sido apontados como agentes causais de diversas moléstias emhumanos, entre as quais a doença da arranhadura do gato, endocardite, meningoencefalite e neuroretinite, podendo levarao óbito, principalmente os imunocomprometidos. O gato doméstico é considerado o principal animal envolvido na transmissãodestes patógenos. Constituiu-se objetivo deste estudo a avaliação da frequência de Bartonella spp. em gatos domésticosdomiciliados do município de Vassouras (RJ) comparando-se os achados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) e nasorologia por imunofluorescência indireta (IFA). Amostras sanguíneas de 37 (100%) gatos de um abrigo da cidade deVassouras (RJ) foram analisadas, sendo 36 (97,3%) positivas na PCR para Bartonella spp. Das amostras PCR positivas,nove (25%) e 27 (75%) apresentaram, respectivamente, reatividade e ausência de reatividade ao IFA. Apenas uma (2,7%)amostra de sangue foi concomitantemente negativa na PCR e IFA para Bartonella spp. Este é o primeiro registro de infecçãopor Bartonella spp. em felinos domésticos no estado do Rio de Janeiro (Brasil) identificada por análise molecular e sorológica,o que nos permite concluir que este agente zoonótico está presente em alta frequência em gatos domésticos do municípiode Vassouras (RJ).

Bartonella henselae and B. quintana have been pointed as causal agents of many diseases in humans, and can lead to death, mainly immunodefficient people. Domestic cat is considered the unique animal in transmission of these pathogens. The purpose of this study was to evaluate the frequency of Bartonella spp. in domestic cats from Vassouras city (RJ) by polimerase chain reaction (PCR) and indirect immunofluorescence test assay (IFA) and compare the results. Blood samples from 37 (100%) domestic cats from a shelter of Vassouras city (RJ) were analyzed and 36 (97.3%) were considered positive by polymerase chain reaction (PCR). The indirect immunofluorescence test assay (IFA) revealed 9 (25.0%) and 27 (75.0%) of that PCR positive samples showed, respectively, reaction and absence of reaction to IFA. Only one sample (2.7%) was negative in PCR and IFA. This is the first communication of Bartonella spp. infection in domestic cats in Rio de Janeiro State (Brazil) identified by molecular and serological assays, thus it can be concluded that this zoonotic agent is present in high frequencies in domestic cats from Vassouras city (RJ).

A review of the occurrence of hemoplasmas (hemotrophic mycoplasmas) in Brazil / Uma revisão da ocorrência dos hemoplasmas (micoplasmas hemotróficos) no Brasil

Recent studies have been conducted in Brazil using molecular techniques for the detection of hemotrophic mycoplasmas in several mammals. In domestic cats, Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum', and 'Candidatus M. turicensis' infections have been identified. These species have also been found in free-ranging and captive neotropical felid species. Two canine hemoplasmas, Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', have been identified in dogs. In commercial swine populations, Mycoplasma suis was found to be highly prevalent, especially in sows. Moreover, novel mycoplasma species have been identified in Brazilian commercial pigs and domestic dogs. A hemoplasma infection in a human patient infected with the human immunodeficiency virus (HIV) was also recently documented. In conclusion, hemoplasma species are common and important infectious agents in Brazil. Further studies should be conducted to better understand their impact on pets, production animals, and wildlife fauna, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised patients.

Estudos recentes utilizando técnicas moleculares para a detecção de micoplasmas hemotróficos em diferentes mamíferos têm sido conduzidos no Brasil. Em gatos domésticos, infecções por Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus M. haemominutum' e 'Candidatus M. turicensis' foram identificadas. Estas espécies também foram encontradas em felídeos neotropicais de vida livre e de cativeiro. Dois hemoplasmas caninos, Mycoplasma haemocanis e 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum', foram identificados em cães domésticos. Em populações comerciais de suínos, Mycoplasma suis possui alta prevalência, especialmente em porcas. Além disso, novas espécies de hemoplasmas foram detectadas em suínos comercias e cães. Infecção por um hemoplasma em um paciente humano infectado com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) foi recentemente documentada. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções no Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em cães e gatos, animais de produção e na fauna silvestre, e também para determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pacientes imunocomprometidos.

Avaliação dos valores gasométricos em cavalos (Equus caballus)da raça Puro-Sangue-Inglês (PSI) submetidos a teste de esforçoem esteira ergométrica / Evaluation of hemogasometric values in Thoroughbred horses

O Puro-Sangue-Inglês (PSI), raça nobre de origem inglesa especializada em corridas, encontra-se difundido em todo o Brasile, dada a falta de dados sobre a fisiologia do exercício destes animais torna-se importante a realização de testes de esforçosob algumas condições características visando a obter informações mais precisas e adequadas quando esses cavalos sãosubmetidos a esforços constantes. Alguns parâmetros mostram-se de grande valia na determinação de performance. Foramutilizados 20 animais em fase de treinamento no Jockey Club Brasileiro, com idade entre 2 e 6 anos, machos e fêmeas,submetidos a testes de esforço em esteira visando avaliar os dados hemogasométricos (pH, pO2 , pCO2, HCO3, excesso debase real (ABE) e p50). Os valores médios variaram nos tempos estudados e foram correlacionados e avaliados estatisticamente.Concluiu-se que a realização de teste de esforço em esteira ergométrica é útil para a determinação destes parâmetros e temcomo principal função avaliar a capacidade atlética de cavalos de corridas, bem como detectar possíveis momentos de baixaperformance permitindo a sua correção.

Thoroughbred horses, a noble English breed specialized in races, are spread in Brazil and due to the lack of data concerningtheir exercise physiology, it is important to do exercise tests under some characteristic conditions in order to obtain precise andproper data as these horses are submitted to constant efforts. Twenty Thoroughbred racehorses in training at Jockey ClubBrasileiro, with age ranging from 2 to 6 years old, males and females, submitted to effort tests on treadmill in order to evaluatehemogasometric (pH, pO2, pCO2, HCO3, actual base excess (ABE) and p50) values. The mean values varied at the studiedtimes and they were statistically evaluated and correlated. It was concluded that the exercise tests on a treadmill are useful forthe determination of this parameters and they have as main role to evaluate the athletic ability of racehorses, as well as to detectpossible poor performance times, allowing their correction.

Avaliação das concentrações séricas de colesterol e triglicerídeos em frangos de corte acometidos de caquexia / Evaluation to level of serum cholesterol and triglicerides in broilers undertaken by cachexia

Com a finalidade de avaliar frangos de corte acometidos pela síndrome caquética e condenados pelo Serviço de Inspeção Veterinária, foram analisadas amostras de soro de 20 frangos acometidos pela síndrome caquética (G1) e de 20 frangos considerados normais e liberados para o consumo (G2) que serviram como controle, coletados em um matadouro no estado de São Paulo. As dosagens foram determinadas através de métodos espectrofotométricos e observou-se uma diferença significativa entre os níveis séricos de triglicerídeos dos dois grupos, o que não foi observado em relação aos níveis de colesterol que foram semelhantes. Evidenciou-se um nível de triglicerídeos séricos mais baixo nos frangos normais.